支原體早發(fā)現(xiàn)于1898年，1956年Robinson等*從細胞培養(yǎng)物中分離出支原體，之后國內外關于支原體污染細胞的報道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中，有100余種。

現(xiàn)在只要是做細胞培養(yǎng)并發(fā)表論文，期刊就要求一定要做支原體檢測。一般要一周測一次支原體。

支原體檢測有好幾種方法。藥典規(guī)定有培養(yǎng)法和DNA染色法。

現(xiàn)在，PCR和qPCR方法也較為常用。PCR法支原體檢測原理是針對支原體16s rRNA保守序列設計引物，只要有支原體DNA擴增片段即證明有支原體污染存在。

qPCR支原體檢測則除了引物外，還會用到探針，均熒光素標記，從而觀察在FAM通道是否有代表支原體的擴增曲線出現(xiàn)。

qPCR屬于比較高級的方法，PCR或者其他方法屬于比較普通的方法，更多用于常規(guī)科研實驗室，PCR也可用于工業(yè)。如用于工業(yè)，則PCR和qPCR均需要完成方法學驗證方案，證明符合歐洲等藥典。

支原體檢測還有其他幾種方法：

如生物化學發(fā)光法：它是通過支原體酶與特異底物反應產(chǎn)生ATP， ATP濃度與其激發(fā)的熒光強度成線性關系。通過檢測熒光強度，從而斷定是否有支原體存在。

如細胞感應法，即通過支原體激活HEK-Blue™-2細胞上的TLR2受體，誘發(fā)分泌堿性磷酸酶，可通過專有培養(yǎng)基變色檢測到支原體的存在。

每種方法都有自己的長處和短處，可從結果是否直觀，操作時間長短，靈敏度，檢測的支原

體種類多少，以及是檢支原體DNA還是活的支原體等方面來評價。

但對于工業(yè)放行檢測而言，迄今為止，只有具有高靈敏度的PCR法或qPCR法才用于工業(yè)，如Minerva Biolabs生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒。而其他方法都是僅能用于科研。

感謝締一生物提供相關內容。